多肽具有一個(gè)顯著的結(jié)構(gòu)性優(yōu)勢(shì)，即可以在不影響原有功能性多肽片段的基礎(chǔ)上，通過固相合成或生物合成，在多肽的一端或兩端引入新的功能性多肽序列，獲得多功能性融合肽。
 

　　這種具有受體/配體結(jié)合能力的pH 敏感脂質(zhì)體進(jìn)入細(xì)胞的機(jī)制，往往不同于普通脂質(zhì)體的融合方式。如類似RGD/αV β3或者Transferrin /TfR的結(jié)合方式，會(huì)誘導(dǎo)腫瘤組織細(xì)胞主動(dòng)內(nèi)吞脂質(zhì)體繼而釋放藥物/核酸，此類多肽修飾的pH 敏感脂質(zhì)體藥物/核酸釋放過程。
 

　　常見的多肽修飾物按照修飾位點(diǎn)可分為四大類：C 末端修飾(酰胺化、硫酸酯化等)、N 末端修飾(乙?；?、脂肪酸化等)、中間殘基修飾(與Se r-、Ty r-、A sn-、Thr-結(jié)合的糖基化修飾;與Ser-、Ty r-、Thr-結(jié)合的磷酸化修飾等)以及環(huán)化修飾。目前對(duì)多肽修飾的研究已經(jīng)成為熱點(diǎn)。
 

　　下面讓我們一起來(lái)了解一下多肽修飾的修飾方法吧
 

　　1.化學(xué)法
 

　　是目前多肽修飾中研究最為成熟、應(yīng)用最為廣泛的修飾方法，它主要包括液相法和固相法。
 

　　1)液相法
 

　　液相法是一種經(jīng)典的方法，在純度監(jiān)測(cè)和規(guī)?；a(chǎn)等方面具有優(yōu)勢(shì)。在肽的環(huán)化修飾中，為避免發(fā)生分子間反應(yīng)生成線性或環(huán)狀的二聚體和多聚體，反應(yīng)需要在高度稀釋的溶液中進(jìn)行(10-3 ～10-4 mol/ L)。但在此高度稀釋的條件下，常存在反應(yīng)時(shí)間延長(zhǎng)、副反應(yīng)較多等局限性，給后處理增加不便。
 

　　針對(duì)這種情況，使用一種空間位阻大的樹突狀硅烷取代碳二亞胺作為縮合劑，代替常規(guī)試劑二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)進(jìn)行溶液方式的內(nèi)酰胺環(huán)肽合成，得到純度很高的目標(biāo)化合物。
 

　　2)固相法
 

　　固相法因?yàn)橐子诜蛛x純化而廣泛應(yīng)用在肽修飾中，采用此法合成的肽修飾物其產(chǎn)率和分離純度也明顯高于采用液相法。在固相肽合成中，C 末端氨基酸殘基與載體相連后再組裝剩余氨基酸，對(duì)合成C 末端修飾肽存在著先天障礙。
 

　　選用相對(duì)普通的2-氯三苯甲基氯樹脂為載體，固相合成全保護(hù)肽亮丙瑞林(Py r-Hi s-Trp-Ser-Tyr-D-Leu-eu-A rg-Pro-NHEt)，25 ℃下乙胺化反應(yīng)5 min 后直接切割側(cè)鏈，實(shí)現(xiàn)了肽片段乙胺化和側(cè)鏈切割步驟的連續(xù)耦合進(jìn)行，避免了中間產(chǎn)物的分離純化，成功為其他C-末端多肽修飾提供借鑒。
 

　　3)酶法
 

　　酶在修飾位點(diǎn)的立體選擇性和溫和快速高效的合成反應(yīng)條件等方面具有極大的優(yōu)勢(shì)。在糖肽合成中，糖基氨基酸經(jīng)酶促縮合反應(yīng)接入寡肽，然后用糖基轉(zhuǎn)移酶完成進(jìn)一步的寡糖修飾，這種酶促反應(yīng)可以在水溶液中進(jìn)行，并且只需要最小限度的保護(hù)。
 

　　但是酶存在著來(lái)源單一，不易獲取等局限性。此外底物中肽鏈氨基酸順序有可能會(huì)影響其修飾效率，以酶法將半乳糖胺連接到肽段上合成糖肽時(shí)，發(fā)現(xiàn)反應(yīng)的產(chǎn)率取決于底物的結(jié)構(gòu)和糖基化兩個(gè)因素，普遍較低。隨著DNA 技術(shù)的發(fā)展和研究的不斷深入，酶將在肽修飾中發(fā)揮越來(lái)越重要的作用。
 

　　4)化學(xué)酶法耦合
 

　　采用化學(xué)和酶法相結(jié)合的化學(xué)酶法來(lái)進(jìn)行肽修飾研究，可減少化學(xué)試劑的過量使用帶來(lái)的污染，同時(shí)也保證了溫和條件下酶催化的產(chǎn)率。固相合成N 端共軛糖基內(nèi)肽-1 衍生物，再在糖基轉(zhuǎn)移酶的催化下將N-乙酰基胺基葡糖化合物連接到化學(xué)法合成的糖肽上，形成目標(biāo)產(chǎn)物N端三糖肽內(nèi)肽-1 類似物，此合成過程只需最小限度的保護(hù)。以修飾的硅膠為固相載體，此載體上用化學(xué)法快速合成肽鍵并酶法合成糖苷鍵，成功合成Sialyl lew is x 抗原。